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Eaivelly 人細(xì)胞凋亡抑制因子 ELISA Kit 用戶指南

更新時(shí)間：2025-04-28 點(diǎn)擊次數(shù)：409

Eaivelly 人細(xì)胞凋亡抑制因子 ELISA Kit 用戶指南

——精準(zhǔn)定量細(xì)胞凋亡抑制因子的科研利器

一、產(chǎn)品概述

Eaivelly 人細(xì)胞凋亡抑制因子 ELISA Kit 是基于雙抗體夾心法（Sandwich ELISA）的定量檢測(cè)試劑盒，專為科研單位設(shè)計(jì)，用于人血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液及尿液中細(xì)胞凋亡抑制因子（IAP）的精準(zhǔn)定量分析。該試劑盒通過高效、靈敏、特異的抗體結(jié)合酶聯(lián)反應(yīng)，生成與目標(biāo)蛋白濃度成正比的顏色信號(hào)，支持 0.2 IU/L 至 6 IU/L 的檢測(cè)范圍，靈敏度達(dá) 3 pg/mL（具體批次可能略有差異）。

二、核心組件與參數(shù)

組件	規(guī)格	功能說(shuō)明
酶標(biāo)包被板	48 孔或 96 孔	預(yù)包被高親和力 IAP 單克隆抗體，支持高通量樣本檢測(cè)。
標(biāo)準(zhǔn)品	2700 ng/L（0.5 mL）	凍干粉，復(fù)溶后用于構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線（濃度梯度：1800、1200、600、300、150 ng/L）。
酶標(biāo)試劑	3 mL（48 孔）/6 mL（96 孔）	HRP 標(biāo)記的 IAP 多克隆抗體，與目標(biāo)蛋白結(jié)合后催化底物顯色。
顯色劑 A/B	各 3 mL（48 孔）/6 mL（96 孔）	TMB 底物，HRP 催化下生成藍(lán)色產(chǎn)物，酸化后轉(zhuǎn)為黃色。
終止液	3 mL（48 孔）/6 mL（96 孔）	2 M 硫酸，終止顯色反應(yīng)，穩(wěn)定顏色信號(hào)。
濃縮洗滌液	20 mL（20 倍濃縮）	使用前需用蒸餾水稀釋至 1 倍工作液，用于去除未結(jié)合物質(zhì)。
說(shuō)明書與封板膜	各 1 份	提供操作指南及密封電泳板，防止蒸發(fā)。

三、技術(shù)優(yōu)勢(shì)

高效靈敏

采用高效價(jià)、高特異性抗體，檢測(cè)限低至 3 pg/mL，確保低豐度蛋白的精準(zhǔn)捕獲。
重復(fù)性 CV% < 9%（批內(nèi)）和 < 11%（批間），保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定性。

廣泛適用性

支持多種樣本類型，包括血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液及尿液，滿足不同研究需求。
吸附性能優(yōu)異，固相載體空白值低，孔底透明度高，確保顯色均勻。

節(jié)省成本

預(yù)包被板設(shè)計(jì)減少人工包被步驟，降低操作難度與試劑消耗。
試劑盒提供 48 孔或 96 孔兩種規(guī)格，適配不同實(shí)驗(yàn)規(guī)模。

四、操作流程

（一）樣本準(zhǔn)備

血清/血漿

室溫靜置 10-20 分鐘使血液自然凝固，2000-3000 rpm 離心 20 分鐘，取上清。
如需長(zhǎng)期保存，分裝后置于 -20℃ 或 -70℃，避免反復(fù)凍融。

組織勻漿液

切割組織后，按 1:10（w/v）加入 PBS（pH 7.4），勻漿后 2000-3000 rpm 離心 20 分鐘，取上清。

細(xì)胞培養(yǎng)上清液

直接收集上清，2000-3000 rpm 離心 20 分鐘，去除細(xì)胞碎片。

（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線構(gòu)建

將標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液進(jìn)行 2 倍梯度稀釋，得到 1800、1200、600、300、150 ng/L 的濃度梯度。
在酶標(biāo)包被板上設(shè)置 10 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔，每孔加入 50 μL 稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品。

（三）加樣與孵育

在待測(cè)樣品孔中加入 40 μL 樣品稀釋液和 10 μL 樣本（稀釋 5 倍）。
每孔加入 50 μL 酶標(biāo)試劑，空白孔僅加稀釋液與酶標(biāo)試劑。
用封板膜密封后，37℃ 孵育 30 分鐘。

（四）洗滌與顯色

棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復(fù) 5 次。
每孔加入 50 μL 顯色劑 A 和 B，輕輕震蕩混勻，37℃ 避光顯色 15 分鐘。
每孔加入 50 μL 終止液，立即在 450 nm 波長(zhǎng) 下測(cè)定 OD 值。

（五）結(jié)果計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
根據(jù)樣品 OD 值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算實(shí)際濃度，再乘以稀釋倍數(shù)（5 倍）。

五、應(yīng)用場(chǎng)景

細(xì)胞凋亡機(jī)制研究

定量分析不同處理?xiàng)l件下 IAP 表達(dá)變化，揭示凋亡調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。

腫瘤生物學(xué)研究

評(píng)估 IAP 在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平，探索其作為治療靶點(diǎn)的潛力。

藥物研發(fā)

檢測(cè)藥物對(duì) IAP 表達(dá)的調(diào)控作用，輔助抗凋亡藥物的篩選與優(yōu)化。

疾病診斷

分析 IAP 在血清或組織中的異常表達(dá)，輔助相關(guān)疾病的早期診斷。

六、注意事項(xiàng)

樣本質(zhì)量

避免使用溶血、脂血或高濃度 NaN? 的樣本，以免干擾檢測(cè)結(jié)果。

操作規(guī)范

加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi)，避免因孵育時(shí)間差異導(dǎo)致誤差。
顯色反應(yīng)需在加終止液后 15 分鐘內(nèi) 完成測(cè)定。

試劑保存

未開封試劑盒需置于 2-8℃ 保存，開封后未用完的板條需密封保存。
濃縮洗滌液在低溫下可能結(jié)晶，使用前需水浴加溫助溶。