實驗前準備

• 試劑和儀器檢查：仔細檢查試劑盒內的試劑是否齊全、有無過期或變質現象。確保 Qubit 儀器已校準并能正常運行，可使用標準品進行定期校準驗證，以保證檢測結果的準確性。

• 樣本保存與處理：對于 RNA 樣本，盡量在新鮮組織或細胞收獲后立即進行提取，避免長時間放置導致 RNA 降解。如果不能及時提取，應將樣本保存在合適的低溫環境（如 - 80℃）中，并使用 RNase 抑制劑等保護劑。在提取 RNA 過程中，要嚴格遵守操作規程，使用無 RNase 的耗材和試劑，防止 RNA 酶污染。

實驗過程

• 樣本稀釋：根據試劑盒的要求和樣本的初始濃度，準確稀釋 RNA 樣本。一般來說，應避免樣本濃度過高或過低，因為這可能會影響熒光染料與 RNA 的結合效率，進而影響檢測結果的準確性。可以先進行預實驗，確定合適的稀釋倍數范圍。例如，對于濃度較高的 RNA 樣本，可進行 10 倍、50 倍、100 倍等不同倍數的稀釋，然后檢測其濃度和質量指標，選擇結果最準確、重復稀釋倍數。

• 染料混合：將 Qubit RNA IQ 染料與樣本充分混合是確保準確檢測的關鍵步驟。按照試劑盒說明書的要求，精確吸取適量的染料到稀釋后的樣本中，使用移液器輕輕吹打或渦旋振蕩，使染料與 RNA 均勻混合。注意避免產生氣泡，因為氣泡可能會干擾熒光信號的檢測。混合后，讓樣本在室溫下孵育適當的時間，使染料與 RNA 充分結合。

• 檢測步驟：將混合好的樣本加入到 Qubit 儀器的檢測管中，確保檢測管清潔、無殘留雜質。將檢測管放入儀器中時，要按照正確的方向和位置放置，以保證儀器能夠準確讀取熒光信號。在檢測過程中，避免儀器受到震動或干擾，同時確保檢測環境的溫度和濕度穩定，因為這些因素可能會對熒光信號產生影響。

實驗后處理

• 數據記錄與分析：及時、準確地記錄檢測結果，包括 RNA 濃度、RIN 值、28S/18S 比值等信息。對數據進行仔細分析，檢查是否存在異常值或不符合預期的結果。如果發現問題，應及時排查原因，如是否是樣本處理不當、儀器故障或操作失誤等，并考慮重新進行實驗。

• 儀器和耗材清潔：實驗結束后，立即清潔 Qubit 儀器和使用過的檢測管等耗材。對于儀器，可按照說明書的要求進行定期維護和清潔，如使用專用的清潔液擦拭儀器內部的光學部件，防止灰塵和雜質積累影響檢測性能。檢測管等一次性耗材應按照生物安全規定進行妥善處理，避免交叉污染。