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CCK-8 細胞活力檢測試劑盒技術詳解

更新時間：2025-06-18 點擊次數(shù)：351

CCK-8 細胞活力檢測試劑盒技術文章

（一）產品概述

CCK-8（Cell Counting Kit-8）細胞活力檢測試劑盒是一種基于 WST-8（水溶性四唑鹽）的高靈敏度、便捷的細胞活力檢測工具。試劑盒主要包含 CCK-8 溶液、細胞培養(yǎng)基、陽性對照品等組分。其中，CCK-8 溶液是核心試劑，WST-8 是一種類似于 MTT 的化合物，可被細胞內的脫氫酶還原為水溶性的橙黃色甲臜產物，該產物的生成量與活細胞數(shù)量成正比，通過測定其在特定波長下的吸光度，即可準確反映細胞活力。

（二）技術原理

CCK-8 檢測的原理基于細胞內脫氫酶的活性。當 CCK-8 溶液加入到含有細胞的培養(yǎng)體系中時，WST-8 可穿透細胞膜進入細胞內。活細胞中的線粒體脫氫酶能夠將 WST-8 還原為橙黃色的甲臜，而死細胞由于缺乏活性的脫氫酶，無法進行該還原反應。在 450nm 波長處測定甲臜產物的吸光度，其吸光度值與活細胞數(shù)量呈良好的線性關系。通過建立標準曲線，即可根據(jù)吸光度值準確計算出細胞活力和細胞數(shù)量。與傳統(tǒng)的 MTT 法相比，CCK-8 法生成的甲臜產物水溶性好，無需裂解細胞，避免了操作過程中因細胞裂解不等因素導致的誤差，使檢測結果更加準確、穩(wěn)定。

（三）應用領域與實際案例

藥物研發(fā)：在新藥篩選和藥物毒性評估中，CCK-8 細胞活力檢測試劑盒被廣泛應用。例如，在抗腫瘤藥物研發(fā)過程中，科研人員將不同濃度的候選藥物作用于腫瘤細胞系，一定時間后加入 CCK-8 溶液檢測細胞活力。通過計算藥物對細胞的半數(shù)抑制濃度（IC50），評估藥物的抗腫瘤活性和毒性，為藥物研發(fā)提供重要數(shù)據(jù)支持，篩選出具有潛力的候選藥物。

細胞生物學研究：在細胞增殖、分化、凋亡等基礎細胞生物學研究中，該試劑盒用于實時監(jiān)測細胞狀態(tài)。如在干細胞分化研究中，使用 CCK-8 檢測不同誘導條件下干細胞的活力變化，判斷細胞是否成功分化以及分化過程中細胞活力的動態(tài)變化，為揭示細胞分化機制提供依據(jù) 。

毒理學研究：在評估化學物質、環(huán)境污染物等對細胞的毒性作用時，CCK-8 法是常用的檢測手段。例如，檢測重金屬離子對肝細胞的毒性，將肝細胞暴露于不同濃度的重金屬溶液中，利用 CCK-8 試劑盒檢測細胞活力，確定重金屬的毒性劑量和作用機制，為環(huán)境安全評估和毒理學研究提供數(shù)據(jù)。

（四）使用方法與注意事項

使用方法

細胞接種：將對數(shù)生長期的細胞消化后，用培養(yǎng)基調整細胞濃度，接種到 96 孔板中，每孔加入適量細胞懸液，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

藥物處理（如需）：根據(jù)實驗目的，向孔中加入不同濃度的藥物或處理因素，繼續(xù)培養(yǎng)一定時間。

CCK-8 檢測：向每孔加入適量 CCK-8 溶液，輕輕混勻后，將 96 孔板放回培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時（具體時間根據(jù)細胞類型和實驗條件確定）。

吸光度測定：使用酶標儀在 450nm 波長處測定各孔的吸光度值，根據(jù)標準曲線計算細胞活力和細胞數(shù)量。

注意事項

試劑儲存：CCK-8 試劑盒應避光保存于 4℃冰箱，避免反復凍融，否則會影響試劑活性。

操作規(guī)范：實驗過程中應嚴格遵守無菌操作原則，避免污染。加入 CCK-8 溶液時，避免產生氣泡，以免影響吸光度測定。

干擾因素：某些具有還原性的物質可能會與 WST-8 發(fā)生反應，影響檢測結果，實驗前需評估樣品中是否存在此類干擾物質，并進行相應處理。

對照設置：實驗中應設置空白對照（只含培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液）、陰性對照（正常培養(yǎng)的細胞）和陽性對照（已知具有細胞毒性或促進細胞生長作用的物質處理的細胞），確保實驗結果的準確性和可靠性。

CCK-8 細胞活力檢測試劑盒憑借其操作簡便、靈敏度高、結果準確等優(yōu)勢，在生物技術多個領域發(fā)揮著重要作用。隨著生物技術的不斷發(fā)展，其應用場景將進一步拓展，同時也將推動相關技術的持續(xù)創(chuàng)新和優(yōu)化。

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